注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

原理是由一對(duì)引物介導(dǎo)，能在動(dòng)植物體外對(duì)特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增，經(jīng)過(guò)n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0＜E＜1,擴(kuò)增效率＝倍，使得檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
 特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對(duì)原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；
?
實(shí)驗(yàn)過(guò)程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

人L選擇素(L-Selectin/CD62L)ELISA  試劑盒 96T/48T 試劑盒

人L苯丙氨酸解氨酶(PAL)ELISA  試劑盒 96T/48T 試劑盒

人Jo1抗體/抗組氨酰tRNA合成酶抗體(Jo1/HRS)ELISA  試劑盒 96T/48T 試劑盒

人I型膠原蛋白（COL-1）ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒

人IκB激酶-α（ IKKα）ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒

人ICE蛋白酶激活因子(IRAP)ELISA  試劑盒 96T/48T 試劑盒

人H鈣粘連蛋白（HCDH13）ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒

人H-ras ELISA  試劑盒 96T/48T 試劑盒

人H1N1 抗體（IgG）ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒

人GTP酶活化蛋白(GAP)ELISA  試劑盒 96T/48T 試劑盒

人FMS樣酪氨酸激酶3配體(Flt-3L)ELISA  試劑盒 96T/48T 試劑盒

人FMS樣酪氨酸激酶3(Flt3)ELISA  試劑盒 96T/48T 試劑盒

人E選擇素(E-Selectin/CD62E)ELISA  試劑盒 96T/48T 試劑盒

人E鈣粘著蛋白/上皮性鈣黏附蛋白(E-Cad)ELISA  試劑盒 96T/48T 試劑盒

四輻射鳥(niǎo)圓線(xiàn)蟲(chóng)PCR檢測(cè)試劑盒規(guī)格磷酸化端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶抗體 規(guī)格： 0.1ml  英文名稱(chēng)：phospho-TERT(Ser1125)

腫瘤易感基因101蛋白抗體 規(guī)格： 0.1ml  英文名稱(chēng)：Tsg101

磷酸化微管相關(guān)蛋白抗體 規(guī)格： 0.1ml  英文名稱(chēng)：phospho-Tau protein(Thr205)

瞬時(shí)受體電位離子通道蛋白5抗體（M亞家族） 規(guī)格： 0.2ml  英文名稱(chēng)：TRPM5

線(xiàn)粒體外膜受體Tom20抗體 規(guī)格： 0.1ml  英文名稱(chēng)：TOM20

泛素特異性蛋白酶1抗體 規(guī)格： 0.2ml  英文名稱(chēng)：USP1

血管非炎癥分子1抗體 規(guī)格： 0.1ml  英文名稱(chēng)：VNN1

01群小川型霍亂弧菌抗體 規(guī)格： 0.2ml  英文名稱(chēng)：V.cholera Ogawa

賴(lài)氨酸缺陷型蛋白激酶1抗體 規(guī)格： 0.2ml  英文名稱(chēng)：WNK1

鋅指蛋白Zdhhc12抗體 規(guī)格： 0.2ml  英文名稱(chēng)：ZDHHC-12

鋅指蛋白415抗體 規(guī)格： 0.2ml  英文名稱(chēng)：ZNF415

5-羥色胺受體2C抗體 規(guī)格： 0.1ml  英文名稱(chēng)：5HT2C Receptor

染色體結(jié)構(gòu)維持蛋白1抗體 規(guī)格： 0.2ml  英文名稱(chēng)：SMC1

相關(guān)抗原17抗體 規(guī)格： 0.2ml  英文名稱(chēng)：SPAG17

磷酸化神經(jīng)突觸素1抗體 規(guī)格： 0.1ml  英文名稱(chēng)：phospho-SYN1(Ser549)

技術(shù)原理：
 DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動(dòng)子的參與下，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。
       在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，DNA在高溫時(shí)也可以發(fā)生變性解鏈，當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此，通過(guò)溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性，并設(shè)計(jì)引物做啟動(dòng)子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。（ DNA高溫變性低溫復(fù)性）
       發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對(duì)于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個(gè)循環(huán)加酶，使PCR技術(shù)變得非常簡(jiǎn)捷、同時(shí)也大大降低了成本，PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用，并逐步應(yīng)用于臨床。