注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

原理是由一對(duì)引物介導(dǎo)，能在動(dòng)植物體外對(duì)特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增，經(jīng)過n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0＜E＜1,擴(kuò)增效率＝倍，使得檢測擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
 特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對(duì)原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；
?
實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

大豆慢生瘤菌 Bradyrhizobium japonicum間型脈孢菌

NR8383(大鼠肺泡巨噬細(xì)胞)枯草芽胞桿菌 Bacillus subtilis

T-細(xì)胞可誘導(dǎo)共刺激分子(ICOS)重組蛋白英文名稱：Recombinant Inducible T-Cell Co Stimulator (ICOS)

煌綠糖膽肉湯/BGLB肉湯/煌綠糖膽增菌/BGLB Broth用于水樣中大腸菌的檢測250克國產(chǎn)/進(jìn)口

大鼠卵巢顆粒細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

人晶體上細(xì)胞英文名稱：SRA01/04

人內(nèi)膜腺細(xì)胞檸檬串珠菌 Leuconostoc citreum

PYG體培養(yǎng)基配套試劑 規(guī)格： 10支/盒 用途： 試劑A和試劑B各一支添加于100ml (027340)PYG體培養(yǎng)基基礎(chǔ)

露濕漆斑菌洛格酵母 Saccharomyces logos

PC-3M-IE8(人前列腺高轉(zhuǎn)移細(xì)胞株)5×106cells/瓶×2

抗生素Ⅴ號(hào)培養(yǎng)基/抗生素5號(hào)培養(yǎng)基/Antibiotic Agar NO.5抗生素微生物的效價(jià)測定250克國產(chǎn)/進(jìn)口

假皮疽組織胞漿菌PCR檢測試劑盒價(jià)格ME-180(人頸表皮細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

G1(發(fā)綠色熒光的小鼠胚胎干細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

人鼻咽母系細(xì)胞  CNE-2Z

EBV-轉(zhuǎn)化人淋巴細(xì)胞  CAM191

人結(jié)腸氟尿嘧啶耐藥株  HCT-8/FU

雙洗瓊脂平板10塊國產(chǎn)/進(jìn)口

抗生素Ⅱ號(hào)培養(yǎng)基(PH6.5-6.6)/抗生素2號(hào)培養(yǎng)基(PH6.5-6.6)/Antibiotic Agar NO.2四環(huán)素、土霉素等的效價(jià)測定250克國產(chǎn)/進(jìn)口

TSN瓊脂/胰蛋白胨亞硫酸鹽新霉素瓊脂/胰酪胨亞硫酸鹽新霉素瓊脂/胰酶亞硫酸鹽新霉素瓊脂/TSN Agar用于梭菌的檢測250克國產(chǎn)/進(jìn)口

3.5% NaC1甘露醇發(fā)酵管BR20支國產(chǎn)/進(jìn)口

大鼠氣管上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

小鼠膀胱平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

Fraser湯增菌液FB1配套試劑 規(guī)格： 2x5支 用途： 試劑A和試劑B各一支添加于225ml（026080）中配成FB1增菌液。

布氏湯 規(guī)格： 250g 用途： 用于空腸彎菌培養(yǎng)及運(yùn)動(dòng)性觀察。(GB、ISO)

白介素1α(IL1α)重組蛋白  Recombinant Interleukin 1 Alpha (IL1a)

骨成型蛋白受體1B(BMPR1B)重組蛋白  Recombinant Bone Morphogenetic Protein Receptor 1B (BMPR1B)

凝血因子Ⅴ(F5)重組蛋白  Recombinant Coagulation Factor V (F5)

技術(shù)原理：
 DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動(dòng)子的參與下，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。
       在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，DNA在高溫時(shí)也可以發(fā)生變性解鏈，當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性，并設(shè)計(jì)引物做啟動(dòng)子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。（ DNA高溫變性低溫復(fù)性）
       發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對(duì)于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個(gè)循環(huán)加酶，使PCR技術(shù)變得非常簡捷、同時(shí)也大大降低了成本，PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用，并逐步應(yīng)用于臨床。