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?黃魚源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒實驗方法步驟

更新時間:2022-03-17      點擊次數(shù):724

黃魚源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒實驗方法步驟:


方法


1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     


10×PCR buffer                   


5 μl     dNTP mix (2mM)             


4 μl     引物1(10pM)                 


2 μl     引物2(10pM)                 


2 μl     Taq酶 (2U/μl)               


1 μl     DNA模板(50ng-1μg/μl)  


1 μl      加ddH2O至 50 μl  


視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。


2調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。


3結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。


4PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl氯仿進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。

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